Imagerie TEP mécanique 18F-prétomanide à cause des modèles bétail de méningite tubarde et opérations humaines

critiquer le esthétique

L’intention somme de cette autopsie rencontrait de amplifier une préinduction radiomarquée quant à les profils dynamiques de concentration-temps à l’associé de la TEP quant à clarifier la pharmacocinétique morale préinvasive (à cause des opérations animales et humaines) et d’accorder l’rendement d’un réduction container du briomanide quant à la méningite tubarde. Nous-même avons réalisé des analyses inter-espèces quant à la homologation préclinique 18F-premomid en beaucoup qu’objet d’imagerie moléculaire quant à accorder de précieux non invasive la acuité de médicaments à cause intégrité le abri et subséquemment rentabiliser la radioimagerie quant à 18F-britomanide inférieurement cGMP quant à coopérer la défi en affermi des premières opérations comme l’bonhomme. En futur 18La TEP/CT prémomide F a été utilisée quant à arracher les TAC et les AUC en mesurant le avertissement TEP aux VOI à cause des modèles bétail et des opérations humaines. Dans lequel des modèles bétail, l’autoradiographie/imagerie tissulaire et la spectroscopie de pile post-mortem ont pareillement été réalisées quant à clarifier la acuité morale singulier ante-mortem, à la coup à cause l’distant et à cause le heure. Évalué fluet du virtuel ignoré des régimes container du brychomide quant à la méningite tubarde, BPaL, le individuel réduction ratifié par la FDA container du bristomanide, a été testé à cause un modèle murin de méningite tubarde pour d’accorder longitudinalement les paliers de purge intraluminal et l’exercice bactériostatique. Intégraux les protocoles ont été approuvés par les comités de l’Institution Johns Hopkins sur la biosécurité, la radioprotection et le ferveur et l’emploi des bétail (RB19M417, MO19M382) et le assemblée d’écoute traditionnel (IRB00303845). 18Le F-prétomanide a été administré suivant aux directives du Cellule de examen sur les médicaments radioactifs de la FDA quant à les médicaments empiriques.

Radiosynthèse de 18F-primomanide

Radiosynthèse de 18Le F-prémétomanide a d’apparence été montré en beaucoup que réfutation manuelle utilisant la translocation atomique hydrofuge de l’billet quant à des opérations animales précliniques. Quant à la transcription dispensaire, la radiosynthèse a été adaptée à la réfutation automatisée de cGMP 18F-britomanide inférieurement ampoule micro-ondes à cause du diméthylformamide en l’éloignement de sels d’billet. Factures d’validation 18F-primomanide, y enregistré les précurseurs radioactifs, les intermédiaires et la détermination in vitro 18F-britomanide, utilisable en astiqué complémentaire.

Corvées animales

Modèle murin de phtisie caverneux

Des souris C3HeB/FeJ femelles âgées de quatre à six semaines (Jackson Laboratory) ont été aérosolisées alors des stocks congelés de la phtisie (H37Rv), à l’associé du principe d’commentaire par enfumage Middlebrook (Extrémité-Col)38.

Modèle murin de méningite tubarde

Des souris femelles C3HeB/FeJ (âgées de 7 à 8 semaines, Jackson Laboratories) ont été blessées par allée intraventriculaire (stocks congelés calibrés alors ~ 6,5 logarithmesdix UFC de la phtisie H37Rv) via un bondon percé à l’associé d’une seringue Hamilton (Hamilton, 88000) et d’un objet stéréotaxique (objet David KOPF, modèle 900, coordonnant 0,6 mm dorsal au bregma, 1,2 mm fléchi à la nervure médiane et 2 mm tripal)20. Les infections ont pu se tramer contre 14 jours.

Modèle lapin de méningite tubarde

Des lapins liliaux de Fiction-Zélande mâles et femelles (âgés de 5 à 7 jours, Robinson Impératifs Inc.) ont été infectés par allée intraventrale (arrière-boutique congelé standardisé alors ~ 6,5 logarithmes)dix De la phtisie H37Rv) via bregma à l’associé d’une seringue à insuline de genre 30. Devanture l’pollution, les lapins ont été anesthésiés alors du chlorhydrate de dexmédétomidine (0,2 μg / g; Zoetis, Florham Park, NJ) et une analgésie caractéristique (lidocaïne 4%; Ferndale IP Inc., Ferndale, MI ) a été appliqué sur le bregma17,19,20. Les infections ont été autorisées à se tramer contre au moins 14 jours précocement la accomplissement de l’imagerie.

emprunt leçon

Toutes les expérimentations animales à cause cette autopsie ont été approuvées par le assemblée de cotte et d’emploi des bétail de l’Institution Johns Hopkins.

Biodistribution ex vivo

souris d’analgésie (n= 4 quant à quelque époque) 18F-britomanide (2,6 ± 1,9 MBq) via la aubaine caudale et soin alors transvasement 1, 2 et 4 heures principalement tard. Les organes et les tissus d’rude ont été prélevés, pesés et la radioactivité gamma voulue. Les conditions sont représentées en remise de la modéré injectée par colis de crêpe (%ID/g).

Afrique

alors transvasement intraveineuse 18F-britomanide, les bétail ont été sacrifiés, perfusés alors une péroraison gâtine et les cerveaux ont été prélevés. Le crêpe a été conçu à cause l’OCT et des sections de 20 μm ont été placées sur des lames. Les tranches radiomarquées ont été placées à l’intime d’une ligature d’commentaire (GE, caché n° 29175523) et exposées contre 2 à 5 demi-vies précocement d’dépendre développées alors une imagerie de emmagasinage du phosphore (GE Typhoon). En conséquence radiolyse, les tissus utilisés quant à l’autoradiographie ont été fixés à cause du aldéhyde et modeste à une nuance à l’hématoxyline et à l’éosine.

Les traitements antimicrobiens et à elles rendement

Les stocks de médicaments ont été préparés et administrés cinq jours par semaine même décrit auparavant30,39. rifampicine (10 mg/kg/lucarne), isoniazide (10 mg/kg/lucarne), pyrazinamide (150 mg/kg/lucarne), britomanide (50 mg/kg/lucarne en couple prises par lucarne), bédaquiline (25 mg/kg/lucarne lucarne) lucarne), du linézolide (100 mg/kg/lucarne fragmentaire couple coup par lucarne) quant à intendance orale a été préparé par étouffement et de la dexaméthasone quant à transvasement intrapéritonéale a été voulue et conservée à 4 °C. Les doses de rat ont été utilisées quant à synchroniser aux doses humaines conforme : rifampicine (10 mg/kg/lucarne), isoniazide (10 mg/kg/lucarne), pyrazinamide (25 mg/kg/lucarne), britomanide (200 mg/lucarne)40bédaquiline (doses orales conforme)41et linézolide (1200 mg/lucarne)42. L’rendement du salaire a été brave par la assaut virale du crâne aveugle (CFU) à 2 et 6 semaines alors le appât du salaire alors des panels 7H11 complétés par du alysse opérant.

La estampe

la tuberculose-Les souris et les lapins infectés ont été imagés à l’intime de conteneurs biologiques scellés et transparents, semblables au période de biosécurité (BSL) -3 et capables de donner O.2– Fusion d’analgésie quant à assurer l’bétail en vie contre l’imagerie même décrit auparavant43. L’propriété PET et l’imagerie micro-CT ultérieure ont été réalisées à l’associé d’un nanoScan PET/CT (Mediso, Arlington, VA) et d’images co-enregistrées obligatoirement. 18F-Prétomanide PET/CT : des souris en ont récépissé une transvasement 18F-britomanid (phtisie caverneux, 3,77 ± 1,78 Mb; méningite TB, 3,88 ± 1,44 Mb q) via la aubaine caudale. Des lapins anesthésiés ont récépissé une transvasement 18F-britomanide (4,65 ± 0,75 MP) via la aubaine de l’drapeau. Le heure d’transvasement a coïncidé alors le appât de l’propriété TEP mécanique. 18F-FDG PET/CT : les bétail ont été imagés même décrit auparavant20.

spectroscopie de pile

Des échantillons périphériques (foyer, crâne et liqueur céphalo-rachidien) ont été prélevés à cause le sérum T arrangéce qui précède quelque antimicrobien44Et le4546. Le foyer a été arrivé à cause des canalisations EDTA (BD Microtainer, Fisher Scientific) quant à la abstraction du sérum. La bédaquiline, un métabolite M2 de la bédaquiline, du primomanide et du linézolide à cause le sérum, le liqueur céphalo-rachidien et le crêpe mandarin de la phtisie Les souris infectées ont été quantifiées à l’associé de la chromatographie liqueur à haute exploit validée (UPLC) et de la spectroscopie de pile en bicyclette (LC-MS/MS) au cabinet de pharmacocinétique des maladies infectieuses de l’Institution de Floride. Les courbes d’calibrage conforme réalisaient la bédaquiline (et son métabolite M2) 2,00 à 0,01 μg/mL, le protomanide 30,00 à 0,01 μg/mL et le linézolide 30,00 à 0,03 μg/mL.

Étudié des cytokines

Des échantillons quant à l’montré des cytokines ont été prélevés à cause les surnageants alors harmonisation du crâne par séchage et stockés à -80 ° C jusqu’à l’montré. L’IL-1α, le messager de élargissement endothélial vasculaire A (VEGFA) et la métalloprotéinase matricielle-8 (MMP-8) ont été analysés à cause des tests Luminex Multiplex par le Commune d’immunologie-oncologie terrienne de l’Institution Johns Hopkins.

opérations humaines

18Le F-prétomanide a été synthétisé inférieurement contour de péroraison infructueux alors une exercice amené digue (40,27 ± 12,82 GBq/µmol) et une sobriété radiochimique digue (> 95 %) à l’associé de cGMP par le Johns Hopkins PET Radiotracer Center. Un cooptation éclairé imprimé a été réussi de complets les volontaires sains et des images anonymes ont été analysées. Intégraux les sujets ont subi un écoute érotique par un accoucheur permis et des tests de cabinet précocement l’imagerie quant à répéter à elles éligibilité. Quelque question a récépissé une modéré intraveineuse de 359,52 ± 2,79 Mo de 18F-primomanide encombré d’une TEP mécanique en utilisant un engagement multicouche soudain alors l’transvasement du marqueur (0 à 60 min) et 180 min alors l’transvasement du marqueur (180 à 210 min) à l’associé d’un digitaliseur Siemens Biograph mCT à 128 tranches. Intégraux les sujets ont été évalués quant à les mode indésirables soudain à la fin des opérations d’imagerie et via un rafistolage téléphonique de encombré 20 à 25 jours alors les opérations d’imagerie. Un radiologue permis a pareillement évalué les images CT de complets les sujets quant à accorder toute étrangeté corporel.

L’montré d’coloré

Les images PET/CT ont été analysées à l’associé de VivoQuant 2020 (Invicro) ou PMOD (3.402) quant à les opérations animales et humaines, respectivement. Comme l’bonhomme, un objet de scissiparité morale (Hammers N30R83) a été administré quant à fournir les VOI et une visionneuse DICOM OsiriX MD 11.0 (Pixmeo SARL) a été utilisée quant à concevoir des images MIP 3D. Les conditions sanguines ont été obtenues en plaçant un VOI à cause le ventricule rustaud du cœur, comme corrigées en sérum en utilisant des capacités d’hématocrite individuelles ou un hématocrite conforme47 et pourcentage de bout des globules rouges du bristomanide48 (Inscription S5). Les conditions de TEP de pile ont été ajustées en utilisant la grosseur de quelque objet partisane à quitter du CT (unités Hounsfield). Les conditions sont exprimées en remise ID/g ou en capacités d’fusion standardisées (SUV) à cause des opérations animales ou humaines, respectivement. Les superpositions Heatmap ont été créées à l’associé de RStudio.

analyses statistiques

Les conditions ont été analysées à l’associé de Prism 8 mouture 8.1.0 (GraphPad). Les ASC ont été calculées en utilisant la pieu trapézoïdale linéal. Les comparaisons ont été faites à l’associé du pratique symétrique de Mann-Whitney-Wilcoxon ou ANOVA encombré du pratique de contraste varié de Bonferroni. sLes capacités ≤ 0,05 ont été considérées même statistiquement significatives.

Aperçu des procès-verbaux

Encore d’informations sur la génération de la examen sont disponibles à cause le récapitulatif du accointance Abstraction Écrin lié à cet exercice.

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